Автоматическая система для радиоиммунологического анализа STRATEC SR 300



РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Радиоиммунологический метод (РИА; син. радиоиммунологический анализ) — основанный на реакции антиген—антитело метод количественного определения биологически активных соединений, обладающих антигенными свойствами, и антигенов микроорганизмов с помощью аналогичных известных антигенов или антител, меченных радиоактивным изотопом. Радиоиммунологический метод позволяет количественно определять в жидкостях организма (сыворотка крови, моча и др.) содержание гормонов и различных антигенов, в т. ч. антигенов микроорганизмов. Основным достоинством Радиоиммунологического метода является его очень высокая чувствительность благодаря использованию изотопной метки антигенов (или антител) и применения сывороток с высоким сродством и специфичностью антител (см.).

Становление и развитие Радиоиммунологического метода связано с работой Ялоу и Берсона (R. S. Yalow, S. A. Berson, I960), предложивших этот метод для определения эндогенного инсулина в плазме крови.

Сущность Р. м. состоит в использовании для определения антигенов (см.) соответствующих иммунных сывороток и введении в систему антиген — антитело антигена, меченного радиоактивным изотопом, напр, йода ( 125 I), в результате чего происходит связывание определяемого (немеченого) и меченого антигена с ограниченным количеством антител. Т. к. меченый антиген добавляется в определенной дозе, то можно определить, какая его часть связалась с антителами, а какая часть осталась несвязанной в результате конкуренции с выявляемым немеченым антигеном. При определенных концентрациях количество меченого антигена, связавшегося с антителами, обратно пропорционально количеству определяемого антигена. Схематически этот процесс можно изобразить следующим образом:

Ria.jpg

После взаимодействия антигенов с антителами образовавшиеся комплексы антиген—антитело (см. Антиген-антитело реакция) отделяют от свободного меченого антигена. Отделение комплекса антиген—антитело производят различными способами: с помощью электрофореза (см.), гель-фильтрации (см.), фракционного осаждения иммунного комплекса этанолом, сульфатом аммония и др., а также с помощью агрегации иммунных комплексов антиглобулиновой сывороткой или сорбции их на иммобилизованных (прикрепленных к поверхности твердой фазы) антителах. Кроме этого, возможна сорбция свободного меченого антигена с помощью добавленных веществ, напр, талька, целлюлозы, кварца, активированного угля и др. Отделив меченый несвязанный антиген от комплекса антиген— антитело, определяют количество меченого антигена, связавшегося в комплексе но количеству импульсов (с помощью сцинтилляционного счетчика). Снижение количества импульсов в единицу времени в сравнении с соответствующими контролями свидетельствует о присутствии гомологичного меченого антигена, связанного с анти-сывороткой, в результате чего меченый антиген не вступил в реакцию и не определяется в комплексе антиген— антитело.

Иммунную сыворотку против определяемого антигена и меченого антигена предварительно оттитровывают и используют в Р. м. в оптимальном разведении, при к-ром происходит связывание 50% внесенной метки. Для оценки результатов применяют данные (график) зависимости связывания меченого антигена сывороткой в оптимальном разведении от концентрации меченого (стандартного) антигена.

Широко применяются в Р. м. антитела сыворотки против антигена, иммобилизованные (адсорби рованные) на поверхности пластика или химически связанные с поверхностью полимера. В 1966 г. Кетт (K. J. Catt) с группой исследователей, а также Уайд и Порат (L. Wide, J. P. Porath) применили в Р. м. иммобилизацию антител на полимере. Была показана возможность иммобилизации антител на сефадексе и целлюлозе, обработанных бромцианом, а также на различных пластмассах без предварительной обработки активатором. Для проведения реакции в полистироловые пробирки с иммобилизованными на внутренней поверхности антителами вносят определяемый антиген. После инкубации несвязанный антиген удаляют промыванием и вносят меченый антиген, который затем удаляют таким же образом, определяя в дальнейшем долю связанной радиоактивной метки.

Существует разновидность Р. м.— метод двойной системы антител, когда комплекс антиген—антитело обрабатывается антиглобулиновой преципитирующей сывороткой (вторые антитела) с последующим отделением преципитата центрифугированием. Добавление вместе с антиглобулиновой сывороткой нормальной сыворотки крови того же животного. от к-рого получены первые антитела, способствует преципитации комплексов.

Определение антигена с помощью меченых антител получило название иммунорадиометрического метода. В этом случае антиген предварительно фиксируют на твердой фазе, напр, в полистироловых пробирках. При постановке реакции определяемый антиген образует комплекс с мечеными антителами, который остается в растворе, а не прореагировавшие антитела взаимодействуют с антигеном, прикрепленным к твердой фазе. В варианте иммунорадиометрического метода — методе двойного связывания — определяемый антиген образует комплекс с антителами, иммобилизованными на твердой фазе. Затем после удаления свободного антигена промыванием поверхности твердой фазы добавляются меченые антитела, выявляющие комплекс. Радиоактивность комплекса антитело — антиген — антитело — 125 I сравнивается с радиоактивностью контрольных проб, проб, заведомо содержащих и не содержащих антиген.

Высокая чувствительность Радиоиммунологического метода (до пикограмм определяемого вещества) позволила более точно определить концентрацию многих биологически активных соединений. К недостаткам Р. м. относят возможное снижение специфичности за счет посторонних примесей в определяемом образце, напр, некоторых лекарств, и наличие в сыворотке крови перекрестно реагирующих антител. Кроме того, у антигенов и антител, меченных гамма-излучающими изотопами, короткий срок хранения; при работе с ними следует соблюдать особые меры безопасности. В этом отношении существует менее опасный метод, сходный по принципу с Р. м., в к-ром применяются антигены или антитела, меченные ферментом (см. Энзим-иммунологический метод). Широкое внедрение Р. м. затруднено из-за трудности получения стандартных меченых сывороток и антигенов, необходимости соблюдать правила работы с радиоактивными веществами, применять дорогостоящее оборудование (гамма- и бета-счетчики, камеры глубокого охлаждения, компьютеры и др.) и реактивы с высоким требованием к чистоте стандартов, а также высокоспецифические сыворотки.

Читайте также:  Когда назначается группа крови и резус фактор

Библиография: Иммунологические методы исследования в клинике и эксперименте, под ред. А. Я. Лысенко, М., 1978; Иммунологические методы, под ред. X. Фримеля, пер. с нем., М., 1979; Чард Т. Радиоиммунологические методы, пер. с англ., М., 1981, библиогр.; Yаlоw R. S. a. Berson S. A. Immunoassay of endogenous plasma insulin in man, J. clin. Invest., v. 39, p. 1157, 1960.

Источник

X Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум — 2018

ПРИМЕНЕНИЕ РАДИОММУННОГО АНАЛИЗА В ИССЛЕДОВАНИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОБ

РИА представляет собой такой метод диагностирования биологически активных веществ в жидкостях, в основе которого лежат реакции антигенов с антителами при применении меченых радионуклидами аналогичных им веществ, которые имеют особые системы связывания. После их взаимодействия образуется иммунный комплекс, который отделяют и изучают его радиоактивность. Известно, что радиоиммунный анализ проводится при помощи стандартных наборов реагентов [1].

В утреннее время производится забор венозной крови. Методика забора достаточно стандартна и не отличается от способа взятия пробы крови для биохимического исследования. Далее в лабораторных условиях проходит отделение сыворотки, которая и используется для постановки РИА [2].

Сыворотку крови смешивают с заданными реагентами. Далее смесь инкубируется в термостате при определенной температуре. В готовой к анализу смеси производят разделение на свободные и связанные радиоактивные изотопы. Только после этого и осуществляется само исследование с расчетом полученных результатов [2].

Радиоиммунный анализ имеет широкое применение в медицине и микробиологии. С его помощью проводится диагностика сердечных и сосудистых заболеваний, болезней эндокринной и иных систем организма. Также часто РИА используются для выявления причины бесплодия, патологии развития плода. В онкологии этот анализ проводят с целью определения маркеров новообразований, чтобы иметь возможность контролировать эффективность лечения. В иммунологии РИА применяется для исследования в крови наличия иммуноглобулинов, ферментов, белков и так далее. Сегодня данный анализ позволяет выявлять концентрацию различных гормонов до миллионной части одного грамма. Таким образом, радиоиммунный анализ крови широко применяется в кардиологии, онкологии, эндокринологии, гинекологии и вирусологии [3].

Врачи выделяют ряд патологических нарушений в организме, при которых рекомендуется проводить данный тип анализа:

а) в кардиологии при диагностике различных тяжелых состояний;

б) при опухолевых процессах данный метод поможет выявить маркеры опухоли, а также даст возможность проконтролировать качество проводимой терапии;

в) эндокринология использует данный способ диагностики достаточно широко. Он позволяет с высокой долей достоверности определить суточные колебания содержания инсулина у больных диабетом. Кроме того, этим способом можно выявить содержание гормонов даже в достаточно малых концентрациях в крови и моче;

г) гинекологи, используя радиоиммунологический анализ, могут продиагностировать причины бесплодия или спрогнозировать возможные нарушения формирования плода еще в материнской утробе или определить динамическое содержание гормонов в течение всего периода менструального цикла.

Самым перспективным РИА является для вирусологии, поскольку позволяет в короткие сроки выявить вирусных возбудителей. Связано это с тем, что в последнее время растет число заболеваемости различными инфекциями, которые распространяются с большой скоростью, вызывая смертность среди людей. Микробиология также применяет этот метод диагностики для выявления инфекционных болезней, которые вызывают патогенные бактерии.

Радиоиммунный анализ достаточно специфичен и имеет высокую чувствительность, что позволяет определить наличие биологически активных веществ в невероятно малых количествах. Проводится этот анализ очень просто, от человека требуется только сдать венозную кровь. Результаты теста получаются точными и готовы уже на следующий день. Также РИА можно автоматизировать. Таким образом, этот анализ позволяет выявлять белки, которые представляют собой продукты жизнедеятельности инфекционных бактерий, что свидетельствует о наличии инфекции в организме [5].

Читайте также:  Физико химический анализ трансформаторного масла

Список использованных источников:

1 Радиоиммунный анализ [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://tvoianalizy.ru/krovi/radioimmunnyj-analiz.html. (Дата обращения: 18.12.2017).

2 Методика проведения радиоиммунного анализа [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://drevo-zhizni.com/novosti-mediciny/radioimmunnyj-analiz. (Дата обращения: 18.12.2017).

3 Применение радиоммунного анализа [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.anews.com/ua/p/-radyoymmunnyj-analyz/. (Дата обращения: 18.12.2017).

4 Особенности радиоиммунного анализа [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.activestudy.info/radioimmunnyj-analiz/. (Дата обращения: 18.12.2017).

5 Радиоиммунный анализ в микробиологии [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://fb.ru/article/339551/radioimmunnyiy-analiz-v-mikrobiologii-primenenie-mehanizm. (Дата обращения: 18.12.2017).

1Научный руководитель: Ермолина Т.А. – кандидат биологических наук, доцент кафедры биологии человека и биотехнических систем САФУ имени М.В. Ломоносова

Источник

РИА-наборы и оборудование для радиоиммунного анализа

С 2009 года компания ООО "Бебиг Изотопен" является дистрибьютором наборов для радиоиммуной диагностики (РИА-наборы), производства компании "Immunotech a.s.", (Франция/Чехия).

Наборы для радиоиммунологического анализа, производства “Immunotech a.s.” (Франция/Чехия)

Наборы для радиоиммунологического анализа используются в радиологических лаборатория и применяются для оценки статуса щитовидной железы, системы репродукции человека – пренатальный скрининг, уровня стероидных гормонов, количественного содержания онкомаркеров, функций надпочечников, гормонов и факторов роста и других.

Наименование Кол-во опред.
AFP IRMA KIT — Альфафетопротеин ИРМА 100/400
AFP screening IRMA KIT — Альфафетопротеин для скрининга ИРМА 100
Albumin RIA KIT — Альбумин РИА 100
Angiotensin I RIA KIT — Ангиотензин I РИА 100
Anti-hTg IRMA KIT— Антитела к тиреоглобулину ИРМА 100
Anti-R TSH RRA — Аутоантитела к рецептору ТТГ РРА 60
Anti-TPO RIA KIT— Аутоантитела к тиреопероксидазе РИА 100
C- peptide IRMA KIT— С-пептид ИРМА 100
CEA IRMA KIT — Антиген раково-эмбриональный ИРМА 100/400
CORTISOL RIA KIT — Кортизол РИА 100
CYCLOSPORINE DIRECT RIA KIT— прямой Циклоспорин 100
FERRITIN IRMA KIT – Ферритин ИРМА 100
FREE β-hCG IRMA KIT – Свободная β-субъединица ХГЧ 100
FSH IRMA KIT— Фолликулостимулирующий гормон ИРМА 100
FT4 RIA KIT – Свободный тироксин РИА 100/400
hCG IRMA KIT— Хорионический гонадотропин ИРМА 100
hCG screening RIA KIT— Хорионический гонадотропин для скрининга РИА 100
Insulin(e) IRMA KIT— Инсулин ИРМА 100
IRMA ACTH— ИРМА Адренокортикотропный гормон 100
IRMA ANTI-GAD— Аутоантитела к GAD 50
IRMA ANTI-IA2— Аутоантитела к IA2 50
IRMA ANTI-INSULIN(E) – Аутоантитела к инсулину 50
IRMA CA 125 ANTIGEN — ИРМА СА 125 Антиген 100
IRMA CA 19-9 Antigen-ИРМА CA 19-9 антиген 100
IRMA GH – ИРМА Гормон роста 100
IRMA IGF-1 – ИРМА Инсулиноподобный фактор роста 1 100
IRMA IGFBP-3 — ИРМА Белок-3 связывающий инсулиноподобный фактор роста 100
IRMA MUC-1 gene associated antigen (CA 15-3) — ИРМА Антиген ассоциированный с геном MUC-1 (СА 15-3) 100
IRMA PTH — ИРМА Паратиреоидный гормон 100
IRMA TOTAL IgE — ИРМА Oбщий иммуноглобулин Е 100
IRMA α -SUBUNIT – ИРМА альфа субъединицa 100
LH IRMA KIT — Лютеинизирующий гормон ИРМА 100
NSE IRMA KIT — Нейронспецифическая енолаза ИРМА 50
OSTASE IRMA KIT — Костная щелочная фосфотаза ИРМА 100
PAPP-A IRMA KIT — Ассоциированный с беременностью сывороточный белок А ИРМА 100
PROLACTIN IRMA KIT— Пролактин ИРМА 100
PSA free IRMA KIT— ПСА свободный ИРМА — Специфический антиген предстательной железы свободный 50
PSA total IRMA KIT— ПСА общий ИРМА — Специфический антиген предстательной железы общий 100
RIA 17α HYDROXYPROGESTERONE – РИА 17 α Гидроксипрогестерон 100
RIA ALDOSTERONE — РИА Альдостерон 100
RIA CYCLIC AMP — РИА цАМФ – РИА циклический аденозинмонофосфат 100
RIA CYCLIC GMP — РИА цГМФ – РИА циклический гуанозинмонофосфат 100
RIA DHEA — РИА Дегидроэпиандростерон 100
RIA DHEA sulfate — РИА Дегидроэпиандростерон сульфат 100
RIA ESTRADIOL — РИА Эстрадиол 100
RIA FT3 — РИА Свободный трийодтиронин 100
RIA HISTAMINE — РИА Гистамин 100
RIA PROGESTERONE – РИА Прогестерон 100
RIA TESTOSTERONE Direct — РИА Тестостерон прямой 100
RIA UNCONJUGATED ESTRIOL – Неконъюгированный эстриол 100
SHBG IRMA KIT – Сексстероид-связывающий глобулин ИРМА 100
THYMIDINE KINASE REA KIT— Тимидинкиназа РЭА 50
TOTAL T3 RIA KIT — Общий трийодтиронин РИА 100/400
TOTAL T4 RIA KIT — Общий тироксин РИА 100/400
TSH IRMA KIT— Тиротропин ИРМА 100/400
β2-microglobulin RIA KIT – β2-Микроглобулин РИА 100
Читайте также:  Расул Гамзатов и успешность современного человека

Преимущества РИА по сравнению с другими биологическими и биохимическими методами:

  • высокая чувствительность, позволяющая определять малые количества вещества (10 -10 г/мл);
  • высокая специфичность, обусловленная принципом иммунологических (антиген-антитело) реакций;
  • высокая точность и воспроизводимость метода;
  • простота выполнения анализа и значительная пропускная способность, дающая возможность проводить без особых трудностей большое количества проб;
  • отсутствие лучевой нагрузки на больного.

Автоматическая система для радиоиммунологического анализа »STRATEC SR 300»

Stratec SR 300 представляет собой открытую систему для автоматического проведения радиоиммунного и иммунорадиометрического анализа с использованием пробирок или шариков с иммобилизованными антителами. STRATEC SR 300 определяет содержание гормонов и онко-маркеров в сыворотке крови пациента методом радиоиммунного анализа (РИА) с использованием метки I-125.

Система состоит из 4 независимых, но взаимосвязанных между собой модулей, контролируемых программным обеспечением центрального компьютера.

Источник

Метки для радиоиммунного анализа

2.6.1. ИОНИЗИРУЮЩЕЕ ИЗЛУЧЕНИЕ, РАДИАЦИОННАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ

Обеспечение радиационной безопасности при проведении радионуклидной диагностики методами радиоиммунного анализа ""

1. РАЗРАБОТАНЫ ФГУН НИИРГ (И.А.Звонова — руководитель разработки, М.И.Балонов, Л.А.Иванова); Управлением Роспотребнадзора по г.Санкт-Петербургу (Г.А.Горский); ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г.Санкт-Петербурге" (В.В.Шапилов).

2. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 28 декабря 2010 г.

3. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 28 января 2011 г.

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

I. Область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее — указания) устанавливают требования к обеспечению и контролю за радиационной безопасностью персонала и населения и предотвращению загрязнения окружающей среды при проведении радиодиагностических исследований "" лабораторными методами с использованием реагентов, меченных радиоактивными изотопами, без введения радионуклидов в организм пациентов в медицинских и научно-исследовательских учреждениях.

1.2. Действие указаний распространяется на проектирование, строительство, реконструкцию и эксплуатацию помещений для подразделений радионуклидной диагностики "", на получение, хранение, использование и учет наборов реагентов для анализов "", выполнение радиодиагностических исследований и на обращение с отходами, полученными после проведения радиоиммунных анализов "".

1.3. Требованиями настоящих указаний должны руководствоваться органы и учреждения Роспотребнадзора, ими могут руководствоваться юридические и физические лица независимо от их подчиненности и формы собственности, планирующие, осуществляющие и контролирующие получение, хранение, использование и учет наборов для радиодиагностических исследований "" и обращение с образовавшимися отходами.

II. Общие положения

2.1. Радионуклидные исследования "" относятся к работам с открытыми радиоактивными веществами, как правило, не выше третьего класса, к тем видам диагностики, при которых пациент не подвергается облучению ионизирующим излучением. Биологическую пробу (плазму или сыворотку крови, другой биологический субстрат, выделенный из организма человека) в пробирке смешивают с раствором меченого радиоактивной меткой исследуемого вещества и с ограниченным количеством высоко специфичного к нему рецептора (антитела, белки плазмы крови, клеточные рецепторы и т.п.). По современной технологии комплементарный лиганд к определяемому веществу наносят на внутренние стенки пробирок. Конкурируя с внесенным радиоактивным аналогом, исследуемое вещество биологической пробы связывается с рецептором на стенках пробирки. Через время реакции, регламентированное фирмой-изготовителем, пробирки освобождают от жидкости, промывают, высушивают и измеряют в специальном счетчике. Радиоактивность пробирки зависит от концентрации исследуемого вещества в биологической пробе. По калибровочной кривой, полученной по стандартным образцам тест-набора, определяют концентрацию исследуемого вещества в биологической пробе. Наиболее распространенное название метода — радиоиммунный анализ (РИА), также используется более общее название — радиоконкурентный анализ.

2.2. Повсеместно в медицинской практике используются наборы для РИА с радиоактивной меткой I, значительно реже используются наборы, меченные Н, С, Р, S. Перечисленные радионуклиды, кроме I, являются чистыми бета-излучателями и не представляют опасности для человека как источник внешнего облучения. I, кроме электронов конверсии и Оже, испускает мягкое рентгеновское и гамма-излучение с максимальной энергией гамма-квантов 35,4 кэВ. Период полураспада I — 59,4 суток. Мощность поглощенной дозы в воздухе на расстоянии 1 м от точечного источника I активностью 1 МБк равна 0,0355 мкГр/ч. Суммарная активность наборов на 100 анализов, как правило, меньше минимально значимой активности (МЗА) на рабочем месте (табл.2.1).

Минимально значимая активность на рабочем месте (МЗА), минимально значимая удельная активность (МЗУА) и удельные активности, при которых допускается неограниченное использование материалов, для радионуклидов, используемых в диагностике ""

Источник

Adblock
detector